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發(fā)布時間:2021-02-01

 

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(Fluid Thioglycollate Medium)是 Brewer 1940 年發(fā)明,自20 世紀50 年代起,國內(nèi)外藥典陸續(xù)將其收錄,用于藥品的無菌檢查。1977 年版《中國藥典》無菌檢查項下,將硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基作為選擇性培養(yǎng)基列入,并注明用于汞砷類化合物的無菌檢查。1985 年版《中國藥典》,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基收載于無菌檢查項下,培養(yǎng)基的名稱為“需氧、厭氣菌培養(yǎng)基”。在此后的各版《中國藥典》及《中國生物制品規(guī)程》,均收載硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基用于無菌檢查。

雖然硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基存在一定的局限性,其不能使所有的梭狀芽孢桿菌生長,但之所以能夠沿用至今,是因為其具有不可替代的巨大優(yōu)勢。即其能在普通有氧環(huán)境下提供厭氧條件,使需氧菌和厭氧菌均能夠生長良好,并易于觀察結(jié)果,這提供了一般實驗室難以達到的厭氧培養(yǎng)條件。
 

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成分分析及原理
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我們先看一下硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配方:

(1)碳源和氮源

酪胨(胰酶水解))L-胱氨酸:是由酪蛋白經(jīng)過胰酶水解后,將大分子的酪蛋白分解為?、胨、肽及多種氨基酸。由于原材料是從奶中提取的酪蛋白,質(zhì)量穩(wěn)定,氨基酸種類多,優(yōu)于一般的胨,與L-胱氨酸構(gòu)成細菌成長所需的氮源。

葡萄糖 : 提供微生物生長所需的碳源。自然界中大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖,由于細菌代謝過程中分解代謝葡萄糖產(chǎn)酸,培養(yǎng)及加熱滅菌時葡萄糖被破壞會產(chǎn)生有毒物質(zhì),因此應(yīng)注意其用量及加熱次數(shù)。

酵母浸出粉 : 酵母浸出粉是由氨基酸類、肽類、水溶性維生素及酵母多糖、酵母核酸組成的一種混合物。它不僅能補充氮源,還能提供微生物生長的各種維生素及氨基酸。

2)無機鹽類

氯化鈉及酪胨、酵母浸出粉中含有的等無機離子,構(gòu)成細菌細胞的組織物質(zhì),具有影響酶活性及調(diào)節(jié)滲透壓的作用。 

3)厭氧(還原)環(huán)境的形成與保持

硫乙醇酸鈉或硫乙醇酸: 在培養(yǎng)基中的主要作用有兩方面,一是L-胱氨酸、葡萄糖有降低氧化還原電位的作用,使深部氧化還原電位較低,因而維持培養(yǎng)基下層的厭氧條件,有利于厭氧菌的生長。二是具有鈍化砷和汞類藥物及防腐劑的抑菌作用。當(dāng)汞鹽等物質(zhì)存在時,它與培養(yǎng)基中的SH 基結(jié)合,抑制了細菌的生長。當(dāng)培養(yǎng)基中有硫乙醇酸鹽時,培養(yǎng)基內(nèi)SH 基增多,消除汞鹽等抑菌現(xiàn)象,有利于細菌的生長。

瓊脂 : 在培養(yǎng)基中加入少量瓊脂,可減少液面流動,降低氧的吸收,維持培養(yǎng)基底部的還原電位,有利于厭氧菌的生長。但應(yīng)選用透明度好的瓊脂,以免影響判斷結(jié)果。

4)氧化還原指示劑

刃天青為氧化還原指示劑,新鮮制備的培養(yǎng)基,溫度較高,培養(yǎng)基管的上部與氧接觸,刃天青呈藍色,而中下部培養(yǎng)基呈無氧狀態(tài),刃天青還原為無色,當(dāng)培養(yǎng)基放置后,培養(yǎng)基與空氣接觸,有溶氧,刃天青被氧化,變?yōu)榉奂t色。

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使用應(yīng)注意事項
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配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基時,除按照藥典規(guī)定的方法制作外,還需要注意以下問題:

1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基有0.075 %的瓊脂,在滅菌后,培養(yǎng)基應(yīng)呈現(xiàn)無渾濁狀態(tài),如果放置一段時間,出現(xiàn)輕微渾濁,尤其是放入冰箱后,渾濁現(xiàn)象更加明顯。渾濁程度一方面可能與培養(yǎng)基用的瓊脂質(zhì)量有關(guān),另一方面也可能與滅菌是否徹底有關(guān),具體情況應(yīng)具體分析。隨著目前無菌檢查對培養(yǎng)基的質(zhì)量要求越來越高,包括北京三藥在內(nèi)的國內(nèi)幾家培養(yǎng)基供應(yīng)商在這方面的研究有質(zhì)的突破,不僅澄明度高,氧化層也能維持穩(wěn)定。

2如果存在大體積配制,然后分裝到小的容器中的情況,應(yīng)注意分裝的均一性。

3培養(yǎng)基在滅菌后至使用過程中取放應(yīng)避免搖晃,以免培養(yǎng)基因振動而進入氧氣,影響培養(yǎng)基的使用,接種操作應(yīng)動作迅速、敏捷。

4在接種前,如果氧化層(粉紅色)的高度超過培養(yǎng)基深度的1/3,須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過20 min),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。

5硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基含有較多的還原性物質(zhì),在滅菌過程中,應(yīng)注意在無菌保證的前提下,避免過熱,以防止PH降低到6.9以下的可能。

6供試品加入到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中之后,可能出現(xiàn)瓊脂析出的情況,這個應(yīng)根據(jù)調(diào)查情況具體分析,并采取有效措施。
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