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發(fā)布時(shí)間:2020-05-28

問:無菌檢查法中,為什么培養(yǎng)基靈敏度檢查用了銅綠假單胞菌,而方法適用性以大腸埃希菌為驗(yàn)證菌株?

 :我國是抗生素及注射劑生產(chǎn)使用大國,銅綠假單胞菌為假單胞菌屬菌種,對(duì)很多抗生素都天然耐藥,藥物敏感度不高,不適合做方法適用性。但假單胞菌屬的細(xì)菌對(duì)培養(yǎng)體系的營養(yǎng)要求高,所以適合做培養(yǎng)基適用性檢查。
 
 

問:什么是不可接受微生物?

答:不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的,存在足夠的數(shù)量,通過產(chǎn)品的給藥途徑可能導(dǎo)致患者不可接受風(fēng)險(xiǎn)的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的,需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析,包括微生物負(fù)載量、微生物特性、產(chǎn)品特性、給藥途徑、對(duì)患者潛在影響等。
 
 

問: 培養(yǎng)基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數(shù)進(jìn)行,是否可行?

答:可以。廠家產(chǎn)品說明書提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用,使用單位也可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況,在相關(guān)法規(guī)要求內(nèi),使用自己驗(yàn)證過的滅菌參數(shù)來執(zhí)行。
【法規(guī)來源:中國藥典2015版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則   ……培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行……】
 
 
 
問:草酸鉀兔血漿和兔血漿的用途分別是什么?
答:草酸鉀兔血漿用于溶血性鏈球菌鏈激酶試驗(yàn),致病性乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶),此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原,使生成血漿蛋白酶,而后溶解纖維蛋白。此實(shí)驗(yàn)乙型溶血性鏈球菌陽性,金黃色葡萄球菌陰性。
兔血漿用于金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗(yàn)。細(xì)菌生成血漿凝固酶后釋放于血漿中,稱為游離凝固酶,不直接作用到血漿纖維蛋白原上,而是被血漿中的致活劑(即凝固酶致活因子)激活后變成耐熱的凝固酶樣物質(zhì),此物質(zhì)纖維蛋白原變?yōu)楣虘B(tài)纖維蛋白,血漿因而凝固。致病性葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶,例金黃色葡萄球菌陽性,表皮葡萄球菌陰性。
 
 

問:革蘭氏染色有哪些注意事項(xiàng)?

答:(1)最好挑選18-24h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,培養(yǎng)時(shí)間過久的的革蘭氏陽性細(xì)菌可能會(huì)被染成紅色而造成假陰性。
       (2)挑取適量的菌,不宜過多,均勻涂開。
       (3)乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵,15-30s為宜,脫色不夠可能會(huì)造成假陽性,脫色過度可能會(huì)造成假陰性。
 
 
問:如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制備斜面?
答:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,擺放斜面一般有三種形式:
(1)長斜面:斜面底部剛覆蓋試管底部,上部距管口2.5-3cm左右;例如TSA傳代斜面。
(2)高層斜面:斜面與底層高度約為2:3,即底部高約3cm,斜面長度約2cm;如三糖鐵高層斜面。
(3)普通斜面:斜面底部距試管底部約1cm,上部距管口約2.5-3cm。
 
 
問:三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么? 
答:該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,只能利用葡萄糖的細(xì)菌,分解葡萄糖產(chǎn)酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸接觸空氣而氧化,加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì),生成堿性產(chǎn)物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態(tài)下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌則產(chǎn)生大量的酸,使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產(chǎn)生黑色沉淀,是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氫,硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng),生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
 
 

問:如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色,中間有黑色且產(chǎn)氣,能否判定為沙門菌?

答:不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現(xiàn)和沙門菌一樣的顏色變化,例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化,需要進(jìn)一步的進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn),確證是否為沙門菌。
如果采用傳統(tǒng)的生化鑒定,可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗(yàn)的方法。
 
 
問: 按照中國藥典2015版1106控制菌檢查法檢測(cè)大腸埃希氏菌,如果麥康凱瓊脂上有疑似菌,如何用傳統(tǒng)方法確證?
答:挑選疑似菌分離、純化。
(1)革蘭氏染色:革蘭氏陰性無芽孢桿菌;
(2)乳糖發(fā)酵試驗(yàn):產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;
(3)IMVIC試驗(yàn)結(jié)果:++--或-+--;
     判定檢出大腸埃希氏菌。
 
 
問: 按照中國藥典2015版1106控制菌檢查法檢測(cè)銅綠假單胞菌時(shí),溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基中加入甘油的作用是什么?
答:作為碳源補(bǔ)充,有利于綠膿菌素的生成。



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